فرمت فایل : WORD (قابل ویرایش)
تعداد صفحات:88
فهرست مطالب:
عنوان صفحه
فصل اول: مقدمه
-هدف و انگیزه
1ـ1ـ کبد 3
1ـ1ـ1ـ آناتومی 3
2ـ1ـ1ـ بافت شناسی 3
3ـ1ـ1ـ فیزیولوژی و کارکردکبد 4
4ـ1ـ1ـ بیماری‌های کبد 5
1ـ4ـ1ـ1ـ هپاتیت سمی و هپاتیت ناشی از داروها 7
5-1-1- تتراکلریدکربن 10
1-5-1-1- مشخصات فیزیکى و شیمیایی 10
2-5-1-1- مکانیسم سمیت تتراکلرید کربن 10
3-5-1-1- علائم مسمومیت با تتراکلرید کربن 12
6-1-1- آسیب‌های سلول کبدی 12
1-6-1-1- پراکسیداسیون چربی 12
2-6-1-1- قوانین شیمی لیپیدپراکسیداسیون 13
3-6-1-1- مراحل شروع و پیشرفت روند لیپیدپراکسیداسیون 16
4-6-1-1- سیستم حفاظتی سلول در برابر لیپید پراکسیداسیون 20
5-6-1-1-تخلیه گلوتاتیونی و استرس اکسیداتیو 25
6-6-1-1- اندازه گیری گلوتاتیون سلولی 26
7-1-1-آنزیم‌های آنتی اکسیدان 28
1-7-1-1- سوپر اکسید دسیموتاز 28
2-7-1-1- کاتالاز 28
3-7-1-1-گلوتاتیون پراکسیداز 29
8-1-1- سیلیمارین 30
1-8-1-1- ساختار سیلیمارین 30
2-8-1-1- مکانیسم عمل سیلیمارین 31
1-2-1- انار 32
2-2-1-انواع گونه های انار و پراکندگی آن 33
1-2 -2-1- ترکیبات شیمیایی انار 34
3-2-1- کاربرد های درمانی انار 35
1-3-2-1- برگ درخت انار 35
2-3-2-1- پوست درخت انار 35
3-3-2-1- دانه انار 36
4-3-2-1-آب انار 36
1-3-1- سلول های HepG2 38
2-3-1- سلول های سرطانی کبد Liver cell lines 39
فصل دوم: مواد، دستگاهها و روشها
1-2- مواد 43
2-2- دستگاه ها 44
3-2- وسایل 46
4-2- روش ها
1-4-2-تهیه عصاره آب انار 47
2-1-4-2-استخراج عصاره هسته انار 48
3-1-4-2-تعیین غلظت سمی عصاره آب و هسته میوه انار 48
2-4-2-تهیه محلول استوک 49
5-2- روش تهیه محلولهاو بافرهای مورداستفاده 49
1-5-2- تهیه بافر فسفاته نمکی یا PBS (M 5/0 ,2/7pH=) 49
2-5-2- محلول 20٪ تری کلرو استیک اسید 50
3-5-2- محلول تیوباربیتوریک اسید 50
4-5-2- محلول DTNB 50
6-2- تهیه مواد لازم جهت کشت سلول 50
1-6-2- تهیه محلول استوک Trypsin و رقیق سازی آن 51
2-6-2- تهیه محلول استوک Trypsin (0.25%) –EDTA (1mM) 51
3-6-2- محیط کشت 51
4-6-2- تهیه محیط کشت حاوی 10% سرم جنین گاو 52
5-6-2- تهیه محیط انجماد سلولها 52
7-2- چگونگی کشت سلول 53
1-7-2- در آوردن سلولها از تانک نیتروژن مایع 53
2-7-2- تعویض محیط کشت 53
3-7-2- واکشت 54
4-7-2- منحنی رشد سلولها 55
5-7-2- شمارش سلولی و تعیین درصد سلولهای زنده (Viability %) 56
1-5-7-2- شمارش سلولی وتعیین درصدسلولهای زنده(Viability %) با تریپان بلو 56
2-5-7-2- تعیین درصد سلول های زنده (%viability)به روشMTT
Assay 57
1-2-5-7-2- محاسبه تعداد مناسب سلول جهت انجام تست MTT 58
2-2-5-7-2- تست MTT 58
6-7-2- آماده سازی سلولها و مراحل انجام آزمایش 60
7-7-2- تعیین درصد زنده بودن سلولها بعد از آزمایش 60
8-7-2- تعیین میزان لیپید پراکسیداسیون 61
8-2- تعیین میزان گلوتاتیون 61
1-8-2- گلوتاتیون احیاء 62
2-8-2-گلوتاتیون تام 62
3-8-2- رسم منحنی استاندارد 62
4-8-2- رسم منحنی استاندارد گلوتاتیون 63
5-8-2- رسم منحنی استاندارد لیپید پراکسیداسیون 63
6-8-2-اندازه گیری ترکیبات فنولی 63
7-8-2- محاسبات آماری 67
فصل سوم: نتایج
1-3- نتایج حاصل از آزمایشات انجام شده توسط تست MTT 69
1-1-3- بررسی سمیت سلولی غلظت های مختلف عصاره آب و هسته ی میوه انار بر رده سلولیHepG2 به روش MTT 69
2-1-3- بررسی سمیت سلولی غلظت های مختلف CCl4 بر رده سلولیHepG2 به روش MTT 70
3-1-3- بررسی اثر محافظتی غلظت های مختلف سیلیمارین در مقابل سمیت سلولی CCl4 71
4-1-3- بررسی اثر عصاره های مختلف آب و هسته انار بر میزان لیپید پراکسیداسیونGSSG , و GSH در سلول های 2HepG 72
5-1-3- اندازه گیری ترکیبات فنولی در عصاره های مختلف آب و هسته میوه انار 73
1-3- بررسی اثر محافظتی عصاره هیدروالکلی آب میوه انار بر سمیت سلولی حاصل ازCCl4 بر سلول های HepG2 75
2-3- بررسی اثر محافظتی عصاره هیدروالکلی هسته میوه انار بر سمیت سلولی حاصل ازCCl4 بر سلول های HepG2 76
3-3- بررسی اثر محافظتی عصاره اتیل استاتی آب میوه انار بر سمیت سلولی حاصل ازCCl4 بر سلول های HepG2 77
4-3- بررسی اثر محافظتی عصاره اتیل استاتی هسته میوه انار بر سمیت حاصل ازCCl4 بر سلول های HepG2 78
5-3- بررسی اثر محافظتی عصاره اِن هگزانی آب میوه انار بر سمیت سلولی حاصل ازCCl4 بر سلول های HepG2 79
6-3- بررسی اثر محافظتی عصاره اِن هگزانی هسته میوه انار بر سمیت سلولی حاصل ازCCl4 بر سلول های HepG2 80
7-3-مقایسه اثر محافظتی عصاره هیدروالکلی آب و هسته میوه انار بر سلول های HepG2 81
فصل چهارم: بحث و نتیجه گیری
1-4-بحث و نتیجه گیری 83
فهرست منابع ومآخذ 88
خلاصه
انار به عنوان یک میوه پر مصرف در ایران و سایر کشورهای جهان است قسمت مورد استفاده درخت انار , گل , برگ, پوست شاخه های جوان و ریشه، پوست میوه, آب انار و عصاره تغلیظ شده آن است. آب میوه ی آن جهت درمان و پیشگیری از بیماری های کبدی در ایران استفاده می شود. در این تحقیق اثرات غلظت های مختلف عصاره های هیدروالکلی، اتیل استاتی و اِن هگزانی از آب میوه و هسته انار )پونیکاگراناتوم) در مقابل سمیت القا ِ شده توسط تتراکلرید کربن در سلول های HepG2 مورد بررسی قرار گرفت. یک ساعت قبل از اضافه کردن mM 100 تتراکلرید کربن غلظت های µg/ml 10000 و 1000 و 100 و 10 و 1 از عصاره ها به سوسپانسیون سلول ها اضافه شدند. بعد از 24 ساعت جهت بررسی سمیت سلولی همچنین سطح سلولی TBARs و محتوای GSH اندازه گیری شدند.
عصاره هیدروالکلی و اتیل استاتی آب میوه انار در غلظت های µg/ml100 و µg/ml 1000 در مقابل سمیت القا شده توسط تتراکلرید کربن اثر محافظتی داشتند و اتیل استاتی نیز بهتر از هیدروالکلی بود اما عصاره هیدروالکلی هسته اثر محافظتی بهتری نسبت به اتیل استاتی داشت و عصاره ان هگزانی آب و هسته میوه نیز در هیچکدام از غلظت های بکار رفته اثر محافظتی نداشتند. عصاره های انار به تنهایی در غلظت های پایین تر از 1 میلی گرم اثر سمی نداشتند. بنابراین نتایج بدست آمده در این تحقیق حاکی از تایید استفاده سنتی از انار(پونیکا گراناتوم) بعنوان یک ترکیب محافظ کبدی است.
کلمات کلیدی: پونیکا گراناتوم، حفاظت کبدی، سلول هایHepG2
پایان نامه بررسی اثر هپاتوپروتکتیو فراکشن های مختلف میوه انار بر سلول های HepG2