لینک دانلود و خرید پایین توضیحات
فرمت فایل word و قابل ویرایش و پرینت
تعداد صفحات: 5
بررسی اثرات منگنز و مس روی رشد و اسپورزایی Trichoderma atroviride
چکیده
اثرات ریزمغذی های کلات منگنز 17% و سوسپانسیون مس 5% روی رشد میسلیومی و اسپورزایی گونه ی Trichoderma atroviride در محیط PDA (عصاره سیب زمینی، دکستروز و آگار) بررسی گردید. غلظت های مختلف 100، 250، 500 و 750 میلی گرم ماده موثره بر لیتر مورد استفاده قرار گرفت. میانگین 3 روز رشد قارچ در تیمارهای 100، 250، 500 و 750 میلی گرم ماده موثره بر لیتر منگنز ، مس و شاهد (بدون ریزمغذی) در حد 95 درصد اطمینان به ترتیب 11/80، 38/81، 88/80، 66/78، 88/51 ،61/15، 11/4، ../0 و72/73 میلی متر در روز محاسبه گردید. در بررسی میزان اسپورزایی این گونه در تیمارهای مورد بررسی حداکثر میزان اسپورزایی در750Mn و حداقل آن در 750Cu میلی گرم ماده موثره بر لیتر مشاهده شد که نشان از سمیت بالای مس در این غلظت برای این گونه می باشد. این تحقیق در بهمن ماه 1389 درآزمایشگاه بیماری شناسی گیاهی گروه گیاهپزشکی دانشگاه بوعلی سینا با هدف بررسی میزان سازگاری ریزمغذیهای مورد استفاده کشاورزان با قارچ تریکودرما که قارچی مفید و آنتاگونیست بسیاری قارچ های پاتوژن گیاهی است انجام گرفت.
کلمات کلیدی: سازگاری ، عناصر کم مصرف ، T.atroviride
مقدمه
تریکودرما از قارچهایی هستند که در خاک و ریزوسفر گیاهان وجود دارند. گونه های آن در مناطق مختلف ، از موجودات غالب میکرو فلور خاک بوده به نحوی که تمام خاکهای مناطق معتدل و استوائی حاوی 103-101 پروپاگول زنده در هر گرم خاک هستند که این ممکن است به دلیل تنوع متابولیسم و ماهیت رقابتی آنها باشد (Rossman, 1996; Samuels, 1996). قارچهای جنس تریکودرما برای کنترل طیف وسیعی از قارچهای پاتوژن گیاهی استفاده می شوند (Benitez, 2004). آنها با خاصیت آنتاگونیستی شدید علیه بسیاری از قارچ های بیماریزای گیاهی از جمله موفق ترین عوامل کنترل بیولوژیکی محسوب می شوند. آنتاگونیستی تریکودرما بر پایه مکانیسم های گوناگونی مثل آنتی بیوز، میکوپارازیتیسم و رقابت می باشد، در این مکانیسم ها نقش اساسی به رشد سریع میسلیومی، اسپورزایی و تولید آنتی بیوتیکها و آنزیم های خارج سلولی نسبت داده شده گزارشها نشان می دهد که فاکتورهای زنده و غیر زنده محیط اطراف ممکن است آنتاگونیستی Trichoderma spp علیه پاتوژن های گیاهی را تحت تاثیر قرار دهند (Jaworska and Dluzniewska, 2007). آلودگی فلزات سنگین ناشی از استفاده بی رویه کودهای شیمیایی در مزارع کشاورزی نیز از جمله فاکتورهایی است که روی اجتماع میکروبی خاک تاثیر به سزایی دارد (Nwuche and Ugoji, 2008). برخی خاکهای حاویی فلز مس و روی کاهش تقریبا 75% از توده ی بیومس قارچی را نشان دادندBaath and) Soderstrom, 1983). برخی میکروارگانیسم ها از جمله تریکودرما قادرند بسیاری عناصر موجود در خاک (عناصر کم مصرف و عناصر پرمصرف) که در خاکها کم و یا غیرقابل دسترس برای گیاهان اند به صورت محلول درآورده و در اختیار گیاه قرار دهند (Altomare et al., 1999). اثر ریزمغذی ها روی رشد و اسپورزایی Fusarium oxysporum f.sp.udum توسط Chauhary and Prasad (1974) مورد آزمایش قرار گرفته است و مشخص شده که رشد و اسپورزایی این قارچ در حضور مس و دیگر عناصر کم مصرف مثل منگنز، آهن، روی و مولیبدیوم کاهش یافت. همچنین بیان شده فلزات سنگین در غلظت های زیاد فعالیت بیولوژیکی میکروارگانیسم ها را کاهش داده و رشد آنها را محدود می کنند (Gikas, 2008). هدف این تحقیق بررسی اثرات 2 عنصر کم مصرف (مس، منگنز) روی رشد و اسپورزایی T.atroviride می باشد تا میزان سازگاری این گونه که قارچی با توانایی آنتاگونیستی بالاست با ریزمغذی های مورد استفاده مشخص شود.
مواد و روشها
گونه قارچی: گونه ی T.atroviride که از گروه گیاهپزشکی دانشگاه بوعلی سینا تهیه گردید و روی محیط PDA (عصاره سیب زمینی، دکستروز و آگار) کشت داده شد و از کشت خالص سازی شده آن برای بررسی های بعدی استفاده گردید. ریزمغذیها: ریزمغذی های مورد استفاده در این تحقیق شامل کلات منگنز 17% و سوسپانسیون مس 5% می باشند که هر کدام در غلظت های 100، 250، 500 و 750 میلی گرم ماده موثره بر لیتر در محیط PDA مورد بررسی قرار گرفتند.
ارزیابی تاثیر ریزمغذیها روی رشد میسلیومی: بدین منظور 9 ارلن حاویی محیط کشت PDA (عصاره سیب زمینی، دکستروز و آگار) تهیه و سترون شد و پس از سرد شدن تا دمای 45 درجه سانتی گراد به هر ارلن مقدار ریزمغذی مشخص شده براساس ماده ی موثره در غلظت های فوق اضافه گردید و سپس به خوبی هم زده شد و در شرایط استریل درون پتری دیش های استریل ریخته شد. برای هر غلظت 3 تکرار در نظر گرفته شد. پس از 24 ساعت از حاشیه ی کشت یک هفته ایی گونه ی تریکودرمای مورد نظر حلقه های 5 میلی متری برش زده و در مرکز پتری دیش های حاویی محیط کشت و عنصر کشت داده شد و در دمای اتاق 2±25 درجه سانتی گراد قرار داده شدند. برای شاهد قارچ در محیط PDA فاقد ریزمغذی رشد یافت. میزان رشد شعاعی هر پتری در فاصله زمانی 48، 72 و 96 ساعت بعد از تلقیح بر حسب میلی متر در روز اندازه گیری و ثبت گردید.
درصد بازدارندگی رشد میسلیومی در 4 غلظت مس با استفاده از فرمول فوق محاسبه گردید ((Sanjeevk and Eswaran, 2008.
ارزیابی تاثیر ریزمغذیها روی اسپورزایی: ارزیابی تاثیر ریزمغذیها حاویی عناصر مورد نظر بر اسپورزایی تریکودرما، یک هفته بعد ار تاریخ تلقیح با استفاده از لام هموسیتومتر مورد بررسی قرار گرفت (Roja, 2006). برای این منظور در هر پتری 10 سی سی آب مقطر ریخته و با اسکارپل سطح قارچ خراش داده شد تا اسپورها از محیط جدا شوند سپس یک قطره از سوسپانسیون روی لام هموسیتومتر ریخته و شمارش اسپور انجام شد و در نهایت میزان اسپور در هر سی سی از سوسپانسیون محاسبه و ثبت گردید. در نهایت تمامی داده ها در نرم افزار SAS مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت و مقایسه میانگین داده ها با استفاده از آزمون چند دامنه ایی دانکن در سطح احتمال 5% انجام شد.
نتایج و بحث
ارزیابی تاثیر ریزمغذی ها روی رشد میسلیومی: در اندازه گیری رشد شعاعی پرگنه های مورد تیمار با ریزمغذی های مشاهده شد 4 غلظت منگنز موجب افزایش میزان رشد پرگنه قارچ شدند و در سطح احتمال 5 درصد تفاوت معنی داری با شاهد نشان دادند (جدول 1). که این نتایج با تحقیقات Kucuk et al., (2008) که توانایی رشد T.harzianum T1را در غلظت های مختلف مس، روی، منگنز و آهن بررسی کرد و نشان داد این قارچ به روی، منگنز و آهن حتی در غلظت های بالا تحمل زیادی دارد انطباق دارد. میزان رشد شعاعی پرگنه قارچ در محیط حاویی مس نیز در تمامی غلظت ها تفاوت معنی داری با شاهد نشان داد (جدول 1) و با افزایش غلظت مس از رشد پرگنه قارچ کاسته شد (نمودار 1). به طوری که در غلظت 750 میلی گرم ماده موثره بر لیتر میزان رشد و اسپورزایی به صفر رسید (جدول2 و 1). که با نتایج حاصل از بررسی های Hashem (1995) که اعلام نمود رشد شعاعی Aspergillus niger در غلظت های بالای آهن و مس کاهش یافت انطباق دارد.
جدول 1- اثرات غلظت های مختلف ریزمغذیها روی رشد میسلیومیT.atroviride درمحیط آزمایشگاه
اندازه قطر کلنی قارچ طی 3 روز مشاهده بر حسب میلی متر در روز
غلظت
ریزمغذی
درصد بازدارندگی میانگین(%)
میانگین3روز
96 ساعت
72 ساعت
48 ساعت
-
a11/80
a90
a90
33/60ab
100
-
a38/81
a90
a90
16/64a
250
-
a88/80
a90
a90
66/62ab
500
منگنز
-
a66/78
a90
ab66/88
33/57b
750
62/29
c88/51
b66/75
c50/50
50/29d
100
82/78
d61/15
c50/24
d33/13
00/9e
250
41/94
e11/4
d00/5
e00/5
f33/2
500
مس
100
e00/0
d00/0
e00/0
f00/0
750
-
b72/73
a 90
b00/84
c 16/47
-
شاهد
ارزیابی تاثیر ریزمغذی ها روی میزان اسپورزایی: در این آزمون پس یک هفته از تاریخ تلقیح میزان اسپورزایی با استفاده از لام هموسیتومتر شمارش و براساس مقدار اسپور در میلی لیتر محاسبه گردید. براساس این نتایج حداکثر میزان اسپورزایی در غلظت 750 میلی گرم ماده موثره بر لیتر منگنز مشاهده گردید که در 95 درصد حدود اطمینان با شاهد و سه غلظت بالایی مس تفاوت معنی داری نشان داد. در غلظت های بالایی مس میزان اسپورزایی به شدت کاسته شد به طوری که در غلظت 500 میلی گرم بسیار اندک و در غلظت 750 میلی گرم ماده موثره بر لیتر، 100% بازدارندگی از رشد و اسپورزایی مشاهده گردید (جدول 2). که نشان از سمیت بالای مس در غلظت های زیاد برای تریکودرما می باشد. که با نتایج حاصل از بررسی هایGrondona et al., (1997) که اعلام نمودند رشد میسلیوم T.harzianum در حضور سولفات مس کاهش یافته نیز انطباق دارد. همچنین Kucuk et al., (2008) بیان نمودند که غلظت های بالای مس جوانه زنی اسپورهای تریکودرما را کاهش می دهد. با توجه به نتایج، منگنز سازگاری خوبی با این گونه ی تریکودرما نشان داد در صورتی که مصرف مس در طولانی مدت می تواند خطر نابودی این قارچ مفید را به دنبال داشته باشد اگر چه با در نظر گرفتن تفاوت تماس قارچ و ریزمغذی در دو محیط invitro و invivo در شرایط مزرعه این اثر بازدارندگی مس کاهش پیدا می کند. بررسی استفاده از ریزمغذی های سازگار با گونه های تریکودرما جهت کنترل بهتر برخی بیماری ها از استراتژی برتر در مدیریت تلفیقی مبارزه با عوامل بیماری زا در آینده است.
تعداد اسپور در میلی لیتر(106×)
غلظت
ریزمغذی
ab43/29
100
ab32/39
250
منگنز
ab25/35
500
a91/66
750
a48/63
100
b08/2
250
مس
b24/0
500
b00/0
750
b78/6
-
شاهد
نمودار1- میزان رشد پرگنه T.atroviride در محیط حاویی منگنزومس
منابع
Altomare C., Norvell W.A., Bjorkman G. & Harman G. (1999). Solubilization of phosphates and micronutrients by the plantgrowth-promoting and biocontrol fungus T. harzianum Rifaii1295–22. Appl. Environ. Microbiol. 65: 2926–2933.
Benitez T., Rincon A. M., Limon M. C., Codon A. C. (2004). Biocontrol mechanisms of Trichoderma strains. International Microbiology. 7: 249-260.
Gikas P. (2008). Single and combined effects of nickel (Ni(II)) and cobalt (Co(II)) ions on activated sludge and on other aerobic microorganisms: A review. Journal of Hazardous Materiale. 159: 187-203.
Grondona I., Hermosa R., Tejada M., Gomis M.D., Mateos P.F., BrIdge P.D., Monte E. & Garcia-Acha I. (1997). Physiological and biochemical characterization of Trichoderma harzianum, a biological control agent against soilborne fungal plant pathogens. Appl. Environ. Microbiol. 63: 3189–3198
Jaworska M., Dluzniewska J. (2007). The Effect of Manganese Ions on Development and Antagonism of Trichoderma Isolates. Polish J. of Environ. Stud. 16: 549-553
Kucuk C., Kivanc M., Kinaci E. & Kinaci G. (2008). Determination of the growth and solubilization capabilities of Trichoderma harzianum T1. Biologia. 63:167-170
Nwuche C. O. & Ugoji E. O. (2008). Effect of heavy metal pollution on the soil microbial activity. J. Environ. Sci. 5: 409-414
Samuels G. J. (1996). Trichoderma:areview of biology and systematic of genus. Mycological. Research. 100: 923-935.
Sanjeek K., Eswaran A. (2008). Efficacy of Micro Nutrients on Banana fusarium Wilt. (Fusarium oxysporum f. sp. cubense) and it’s Synergistic Action with Trichoderma viride. Not. Bot. Hort. Agrobot. 36: 52-54.
Effects of manganese and copper on growth and sporulation of Trichoderma atroviride
تحقیق درباره بررسی اثرات منگنز و مس روی رشد و اسپورزایی
